從 0 到 1 教你!冷凍研磨儀處理宮頸組織樣品的正確知識(shí)

　　今天和大家分享一次超實(shí)用的宮頸組織樣品前處理過(guò)程!在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，樣本前處理直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，這次用到的冷凍研磨儀簡(jiǎn)直是 “神助攻”!

　　材料準(zhǔn)備清單：

　　冷凍研磨儀：實(shí)驗(yàn)的核心設(shè)備，低溫環(huán)境能有效保護(hù)樣品生物活性

冷凍研磨儀

冷凍研磨儀 JXFSTPRP-CLN

　　Trizol：核酸提取的關(guān)鍵試劑，能高效裂解細(xì)胞

　　宮頸組織：本次實(shí)驗(yàn)的主角，不同樣本特性決定處理方法

　　研磨珠、研磨管：輔助研磨，幫助充分破碎組織

　　詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟：

　　儀器預(yù)冷：實(shí)驗(yàn)前將冷凍研磨儀預(yù)冷至 - 20℃，這一步非常重要!低溫環(huán)境能最大限度保留樣品中的生物活性物質(zhì)，保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)的可靠性。

　　樣品預(yù)處理：由于宮頸組織中結(jié)締組織含量較高，直接研磨效果不好。我先用手術(shù)剪將樣品仔細(xì)剪碎，再放入 2ml 研磨管，加入適量研磨珠和核酸提取液 Trizol，采用濕磨的方式進(jìn)行處理。

　　設(shè)置研磨參數(shù)：把研磨儀頻率設(shè)為 60Hz，研磨時(shí)間 60 秒。這個(gè)參數(shù)是我多次實(shí)驗(yàn)總結(jié)出來(lái)的，能讓組織研磨得既充分又不會(huì)過(guò)度破壞樣本。

　　室溫靜置：研磨完成后，將樣品在室溫(15℃-30℃)下放置 5 分鐘，讓核酸蛋白復(fù)合物充分分離，為后續(xù)提取做準(zhǔn)備。

　　加入氯仿萃?。好?1ml Trizol 對(duì)應(yīng)加入 0.2ml 氯仿，劇烈振蕩 15 秒后，室溫靜置 3 分鐘。這一步能有效分層，便于后續(xù)分離。

　　低溫離心：最后在 4℃環(huán)境下進(jìn)行離心操作，分離出上清液和沉淀物，上清液中就含有我們需要的核酸啦!

　　實(shí)驗(yàn)效果：

4-30- 實(shí)驗(yàn)案例底圖.jpg

宮頸組織研磨前后效果對(duì)比圖

　　實(shí)驗(yàn)小貼士：

　　儀器配平：使用冷凍研磨儀和離心機(jī)時(shí)，一定要注意配平!否則不僅影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，還可能損壞儀器。

　　規(guī)范操作：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程最好在通風(fēng)柜中進(jìn)行，Trizol 和氯仿都具有一定揮發(fā)性，保護(hù)自己才能更好地做實(shí)驗(yàn)!

　　低溫保護(hù)：盡量全程保持低溫環(huán)境，防止樣品失活，從預(yù)冷儀器到低溫離心，每一步都不能馬虎!

　　希望這次的分享能給做相關(guān)實(shí)驗(yàn)的小伙伴帶來(lái)幫助～通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，清晰展現(xiàn)了冷凍研磨儀在宮頸組織樣品前處理中的高效與可靠。從預(yù)冷準(zhǔn)備到參數(shù)設(shè)置，每一個(gè)環(huán)節(jié)都至關(guān)重要。后續(xù)還將圍繞不同樣本特性及實(shí)驗(yàn)需求，繼續(xù)探索冷凍研磨儀的更多應(yīng)用可能，期待為大家?guī)?lái)更多實(shí)用的科研經(jīng)驗(yàn)分享!

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